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【解決方案】軟毛青霉酸的分析方案
發(fā)布日期:2024/9/3

2024年4月,報(bào)道有消費(fèi)者在服用含紅曲保健品后死亡,該事件對(duì)社會(huì)影響甚大,調(diào)查發(fā)現(xiàn)問(wèn)題成分可能為軟毛青霉酸。軟毛青霉酸是一種由青霉菌產(chǎn)生的毒素,青霉菌可產(chǎn)生多種抗生素,如青霉素、紅霉素、鏈霉素等,拯救了億萬(wàn)人的生命,而并非所有青霉菌都能救人,此次涉事的軟毛青霉酸具有較大毒性,可侵害人體實(shí)質(zhì)器官。


紅曲在發(fā)酵過(guò)程中可能產(chǎn)生huangqumeisu、桔青霉素,目前,各國(guó)設(shè)定了紅曲中桔青霉素的xianliangbiaozhun,而對(duì)軟毛青霉酸的研究較少,相關(guān)部門亟需制定新的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn),加強(qiáng)對(duì)紅曲等發(fā)酵產(chǎn)品的監(jiān)督,進(jìn)一步保證食藥安全。


迪馬科技使用色譜柱Diamonsil® C18(2), 250x4.6mm, 5μm (Cat.#: 99603),乙腈-1%三fuyisuan10:90作流動(dòng)相,建立了軟毛青霉酸的高效液相色譜分析方法。在該方法下,軟毛青霉酸在0.001~0.2μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系,定量限約為0.1μg/mL,檢測(cè)限約為0.05μg/mL,可供廣大客戶參考。



HPLC法   
01、標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

(1)取軟毛青霉酸(0.1mg/瓶)1瓶,加入1mL甲醇配制成濃度0.1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

(2) 分別取軟毛青霉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液適量,用甲醇稀釋配制成濃度分別為0.1μg/mL、0.2μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。




02、色譜條件


色譜柱:Diamonsil® C18(2),4.6mmx250mm,5μm (Cat.#: 99603)

流速:1.0mL/min

進(jìn)樣量:10μL

柱溫:35℃

檢測(cè)波長(zhǎng):270nm

流動(dòng)相:乙腈:1%三fuyisuan=10:90

儀器:島津LC-2040C







03、方法學(xué)考察結(jié)果

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的確定

軟毛青霉酸的紫外掃描圖如下圖所示。從圖中可知,軟毛青霉酸的最大吸收波長(zhǎng)為270nm。

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3.2 線性關(guān)系

分別進(jìn)樣7個(gè)梯度濃度的軟毛青霉酸標(biāo)準(zhǔn)溶液,記錄峰面積,以進(jìn)樣濃度( x,μg/mL )為橫坐標(biāo),峰面積( y )為縱坐標(biāo),作標(biāo)準(zhǔn)曲線,并以最小二乘法計(jì)算得回歸方程:Y=117555X-27508.4(R=0.9996),結(jié)果顯示軟毛青霉酸在0.001~0.2μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

圖片


3.3 檢測(cè)限及定量限

軟毛青霉酸溶液在約10倍信噪比的濃度(S/N=10)即為定量限(LOQ),LOQ約為0.1μg/mL;約3倍信噪比的濃度(S/N=3)即為檢測(cè)限(LOD),LOD約為0.05μg/mL。


3.4 精密度

取1μg/mL軟毛青霉酸溶液連續(xù)進(jìn)樣6次,記錄峰面積,峰面積RSD為0.18%,小于2%,表明儀器精密度良好。


3.5 穩(wěn)定性

取2μg/mL軟毛青霉酸溶液分別在0、24、28、40h進(jìn)樣,記錄峰面積,峰面積RSD為0.64%,小于2%,表明標(biāo)準(zhǔn)品溶液在0~40h內(nèi)能夠保持穩(wěn)定。

04、實(shí)驗(yàn)總結(jié)

綜上,得出軟毛青霉酸測(cè)定方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果,如下表所示。

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UPLC-MS法


01、標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制:取適量標(biāo)準(zhǔn)品,用甲醇溶解并定容,配制成標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,濃度為100μg/mL。

標(biāo)準(zhǔn)上機(jī)溶液的配制:取適量標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,用10%甲醇水逐級(jí)稀釋,配置成濃度為0.1μg/mL標(biāo)準(zhǔn)上機(jī)溶液。



02、儀器條件

(1)UPLC條件

色譜柱:Diamonsil® Plus SCX,150x4.6mm, 5μm (Cat.#: 99420)

流速:0.3mL/min

進(jìn)樣量:10μL

柱溫:35℃

流動(dòng)相:A:水  B:乙腈

梯度設(shè)置:

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(2)質(zhì)譜條件

電離模式:ESI

掃描方式:負(fù)離子掃描

檢測(cè)方式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)

電噴霧電壓:-4500V

霧化氣壓力:50psi

輔助氣壓力:50psi

氣簾氣壓力:20psi

離子源溫度:500℃

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03、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

目標(biāo)物峰面積和峰高匯總結(jié)果:

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